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siRNA表达载体的构建

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所在地: 上海
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最后更新: 2007-09-18 14:59
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公司基本资料信息
 
 
产品详细说明
RNAi原理 将构建好的siRNA载体转入细胞进行RNAi操作,载体在真核细胞中转录出shRNA(short hairpin RNA),shRNA的loop结构被切除产生siRNA,siRNA的反义链在细胞内与特定蛋白结合形成RISCs(RNA-induced Silencing Complexes),通过siRNA的反义链与特异mRNA序列互补结合,剪切mRNA导致其降解,从而在细胞内产生基因silencing作用。 siRNA表达载体的构建--传统模式 1. 选择合适的siRNA表达载体,推荐购买国外知名品牌的。 2. 根据目的mRNA序列,设计RNA干扰靶序列。 3. 根据靶序列设计shRNA,合成每条编码shRNA的两条单链DNA 模板两条单链。大约60bp. 4. 将双链DNA模板退火连接到siRNA表达载体中。 5. 挑选阳性克隆,测序验证序列正确性。 DoGene自我研发的克隆方式适合高通量的siRNA表达载体的构建,每批400个克隆/week。大宗客户将给予的合同价。 服务要求: 1. 以E-mail或传真的方式告知选定的siRNA序列信息,或者告知目的mRNA序列(或NCBI数据库的相关登录号),由我们免费设计siRNA序列; 2. 提供所需克隆的siRNA表达载体和克隆要求,如需阴性对照(Scrambled siRNA)请说明。 3. 构建成功后如需提供转染细胞的无内毒素质粒,请说明浓度及总量要求,价格另议。 4. 价格:请询价!根据您的具体情况商谈; 5. 时间:一般10~15工作日,根据您的要求具体联系。 操作流程: 1. 根据客户提供的SiRNA序列设计克隆方案,如由我们免费设计的SiRNA序列则需客户确认后再设计克隆方案; 2. 构建目的重组载体并测序及制备质粒; 3. 如是常规siRNA表达载体构建,提供质粒(5ug)及菌液(甘油)一份,并附质粒测序报告及质粒酶切电泳图。
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